糖心VLOG

显色液滴加位置偏差：未滴加到孔底反应区域，而是滴在孔壁上方，导致显色液与酶标物接触不充分，但部分残留酶标物会随液体流动集中反应，反而局部信号增强；

未充分混匀：添加显色液后未轻轻震荡多孔板（或震荡力度不足），导致孔内酶标物与显色液分布不均，部分区域反应过度，整体 OD 值偏高；

显色液分装污染：将显色液分装到 EP 管时，使用了被酶污染的移液器或容器，导致分装后显色液提前激活，加入反应孔后快速显色。

温湿度波动：显色时实验环境湿度低于 40%，会加速孔内液体蒸发，导致显色液浓度升高，反应速率加快；若环境温度骤升（如靠近空调出风口、加热器），局部温度超标引发异常显色；

震动或碰撞：显色期间移动多孔板、碰撞实验台，导致孔内液体飞溅，相邻孔交叉污染（高信号孔污染低信号孔），使部分孔 OD 值假性偏高。

底物未平衡至室温：低温储存的显色底物（如 TMB）未提前复温至室温（18-25℃），直接加入 37℃孵育后的反应孔，温度骤变会激活部分底物，导致非特异性显色；

底物开封后未及时使用：显色底物开封后暴露在空气中超过 1 小时，氧气、二氧化碳干扰会导致底物活性变化，加入孔后反应强度异常；

不同批次底物混用：将两批次显色底物混合使用，批次间浓度、活性差异导致部分孔反应过度，数值偏高。

终止液浓度异常：未按说明书要求配制终止液（如硫酸终止液应 0.5mol/L 实际配制成 1mol/L），高浓度终止液可能破坏显色产物稳定性，导致吸光度异常升高；

终止液添加速度不一致：手动加样时部分孔快速滴加、部分孔缓慢滴加，缓慢滴加的孔中，终止液未及时扩散，酶促反应仍持续数秒，导致 OD 值偏高；

终止液污染或变质：终止液中混入水分（稀释浓度）、酸雾（如硫酸终止液吸收空气中水分），或因储存不当导致成分变质，无法快速终止酶活性；

终止后未及时检测：终止反应后未在 10-30 分钟内用酶标仪检测，显色产物（如 TMB 终止后的黄色化合物）会随时间氧化褪色，但部分试剂盒底物可能出现反跳现象（吸光度回升），导致数值偏高。

终止后剧烈震荡：终止反应后过度震荡多孔板，导致孔内气泡产生，气泡在酶标仪检测时会反射光线，使吸光度读数假性偏高；

孔内残留终止液滴：终止液添加后未去除孔壁残留液滴（如未甩板或用滤纸轻拍），液滴聚集导致局部浓度过高，检测时信号异常；

交叉污染：终止液加样枪头重复使用，或枪头接触已终止反应的孔液后再移至其他孔，导致高信号样本污染低信号样本。

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